细胞平台

一、稳转细胞株构建服务内容:

稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。

在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞,是功能研究的前提条件之一。而稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染(或转染)一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。

用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上,得到单细胞长出的阳性单克隆,继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。

稳定细胞株服务流程:
1、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上。
2、筛选浓度测定:以一定天数的细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
3、细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到 70%-90% 覆盖。
4、细胞转染:用构建好的载体转染目的细胞。
5、抗生素筛选,多轮。 6、鉴定筛选结果,逐步建立稳定细胞株。

二、流式细胞仪服务内容:

1、快速测量、存贮、显示细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,及细胞亚群

2、分析细胞表面标志

3. 分析细胞内抗原物质

4. 分析细胞受体

5. 分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量

6. 分析免疫细胞的功能

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